Development of LC-MS/MS methods for the analysis of reactive metabolite protein targets

Golizeh, Makan (2015). « Development of LC-MS/MS methods for the analysis of reactive metabolite protein targets » Thèse. Montréal (Québec, Canada), Université du Québec à Montréal, Doctorat en chimie.

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Résumé

Un grand nombre de médicaments, de produits naturels et de substances endogènes subissent les transformations métaboliques en formant des « métabolites réactifs » qui peuvent réagir avec des biomolécules, altérer leurs fonctions moléculaires et affecter des processus biologiques. Le foie joue un rôle prédominant dans le métabolisme, et les protéines hépatiques sont souvent ciblées par les métabolites réactifs causant potentiellement l'hépatotoxicité. L'identification de ces protéines est donc essentielle pour mieux comprendre les mécanismes reliés à cette toxicité. Plusieurs essais ont été effectués afin d'étudier les liaisons covalentes sur les protéines et identifier leurs cibles potentielles. Toutefois, la faible abondance des protéines modifiées, les problèmes techniques, et l'absence de méthodes appropriées pour analyser des échantillons biologiques ont été les défis limitant le progrès de cette recherche. Parmi les techniques analytiques employées en bioanalyse, la spectrométrie de masse (MS) est devenue la méthode de choix en raison de sa capacité exceptionnelle d'acquérir des grandes quantités de données qualitatives et quantitatives à partir de mélanges complexes. La spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) couplée à la chromatographie liquide (LC) a permis l'analyse efficace des échantillons protéiques avec une grande sensibilité dans la recherche protéomique. La thématique principale de cette thèse a été le développement d'une approche analytique pour identifier les protéines cibles des métabolites réactifs et leurs sites de modifications par LC-MS/MS. Cette recherche a été organisée en trois phases, selon un des principaux défis posés dans ce type d'analyse : (1) préparation d'échantillon, (2) détection par LC-MS/MS, et (3) traitement des données. Premièrement, la méthode analytique a été optimisée pour l'analyse protéomique dans les fractions S9 et microsomales de foie de rat, souris, et humain. Puis, des microsomes de rat ont été incubés avec l'acétaminophène, formant un métabolite réactif, afin de générer des adduits protéiques, puis analysés par la méthode développée en utilisant une stratégie de traitement de données multi-étage. Une approche plus ciblée a été également établie afin d'étudier la modification covalente de métalloprotéase matricielle 13 par le produit de peroxydation lipidique, 4-hydroxynonénal. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : liaison covalente, métabolites réactifs, LC-MS/MS, microsomes de foie de rat, acétaminophène, métalloprotéase matricielle 13, 4-hydroxynonénal

Type: Thèse ou essai doctoral accepté ()
Informations complémentaires: La thèse a été numérisée telle que transmise par l'auteur.
Directeur de thèse: Sleno, Lekha
Mots-clés ou Sujets: Métabolites réactifs / Liaisons covalentes / Protéines / Foie / Biotransformation / Chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse / Spectrométrie de masse en tandem / Microsomes / Protéomique
Unité d'appartenance: Faculté des sciences > Département de chimie
Déposé par: Service des bibliothèques
Date de dépôt: 30 janv. 2017 16:33
Dernière modification: 30 janv. 2017 16:33
Adresse URL : http://archipel.uqam.ca/id/eprint/9288

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