Profilage protéomique et métabolomique par LC-MS/MS pour découvrir des changements induits par la formation de métabolites réactifs in vivo

Kazemdokhtmoghaddam, Ghazaleh (2018). « Profilage protéomique et métabolomique par LC-MS/MS pour découvrir des changements induits par la formation de métabolites réactifs in vivo » Mémoire. Montréal (Québec, Canada), Université du Québec à Montréal, Maîtrise en chimie.

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Résumé

L'acétaminophène (APAP) est la principale cause d'insuffisance hépatique aiguë en Amérique du Nord, liée à la formation de son métabolite réactif, N-acétyl-pbenzoquinone imine (NAPQI). Cette étude est divisée en deux sections principales, comprenant une étude protéomique sur les protéines du foie de rat et de souris traités avec l'APAP (chapitre 2) et une étude métabolomique dans le plasma de rat en utilisant la chromatographie en phase inverse couplée à la spectrométrie de masse (RPLC-HR-MS/MS) ( chapitre 3). Lors d'études protéomiques, des protéines de foies de rat et de souris ont été digérées puis séparées par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) par échange de cations forts, et ensuite par chromatographie en phase inverse couplée à la spectrométrie de masse en tandem à haute résolution. Les résultats obtenus montrent que plusieurs protéines ont été modifiées par le métabolite réactif de l'acétaminophène, le NAPQI. Fait intéressant, deux protéines modifiées ont été trouvées dans les deux espèces de rongeurs, à savoir l'anhydrase carbonique 3 et la triose-phosphate isomérase. La plupart des protéines identifiées ont un effet protecteur contre le stress oxydatif sur les cellules et sont impliquées dans des voies biologiques qui réduisent la mort cellulaire induite par des espèces réactives. Dans cette étude, une méthode de chromatographie en phase inverse extra longue, sans aucune étape de fractionnement, a également été effectuée. Pour mieux caractériser les perturbations métaboliques qui se produisent après le dosage avec l'acétaminophène, une approche d'analyse métabolomique non-ciblée a été employée pour analyser des échantillons de plasma de rat. Ces listes filtrées, provenant d'études métabolomiques non-ciblées, ont été regroupées par «tendances de dose», y compris «augmenter ou diminuer avec la dose» ou «liées à la toxicité» si un pic n'a été significativement élevé que pour le taux de dosage le plus élevé d'acétaminophène (qui montrait des signes cliniques de toxicité). L'analyse en composantes principales a ensuite été utilisée pour visualiser le contrôle et les groupes dosés en utilisant uniquement les fonctions filtrées. Une fois que nous avons eu une liste de métabolites intéressants à partir de l'analyse métabolomique non-ciblée, une analyse ciblée par observation de réactions multiples (MRM) a été optimisée, en incluant aussi plusieurs métabolites d'APAP connus. Cette méthode a été appliquée sur des échantillons de plasma de rats à plusieurs doses et plusieurs temps après le dosage. Les graphiques montrent que les métabolites d'acétaminophène corrèlent bien avec le dosage et le temps. La combinaison de ces deux études (métabolomique et protéomique) peut potentiellement améliorer les connaissances actuelles des mécanismes responsables des lésions hépatiques induites par l'acétaminophène. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Spectrométrie de masse, bio-analyse, acétaminophène, protéomique, cibles potentielles, métabolomique, métabolites réactifs, rat et souris

Type: Mémoire accepté
Informations complémentaires: Le mémoire a été numérisé tel que transmis par l'auteur.
Directeur de thèse: Sleno, Lekha
Mots-clés ou Sujets: Paracétamol / Métabolites / N-acétyl-p-benzoquinone imine (NAPQI) / Protéomique / Métabolomique / Effets des médicaments sur le foie
Unité d'appartenance: Faculté des sciences > Département de chimie
Déposé par: Service des bibliothèques
Date de dépôt: 22 oct. 2018 10:15
Dernière modification: 22 oct. 2018 10:15
Adresse URL : http://archipel.uqam.ca/id/eprint/11749

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