Effet de mutations de l'ARN hélicase DDX10 associées au cancer du sein

Moujaber, Ossama (2013). « Effet de mutations de l'ARN hélicase DDX10 associées au cancer du sein » Mémoire. Montréal (Québec, Canada), Université du Québec à Montréal, Maîtrise en biologie.

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Résumé

DDX10 est une ARN hélicase de la famille « DEAD-box ». Ces enzymes sont caractérisées par la présence de neuf motifs conservés formant un cœur catalytique, lequel est flanqué par des extensions qui varient en longueur et en composition d'acides aminés. Des mutations dans l'extension C-terminale de DDX10 ont été associées au cancer du sein (Sjoblom et al., 2006). Ces deux mutations consistent en une mutation ponctuelle du 566e acide aminé et une délétion de 25 acides aminés. Pour examiner l'effet de ces mutations sur la fonction de DDX10, nous avons fait des expériences d'immunomicroscopie et d'immunobavardage et les résultats montrent que le plasmide pcDNA3.1 n'est pas un bon choix pour l'expression de la protéine 3FLAG-DDX10, ce qui dirige le travail vers l'utilisation du plasmide pBact-FLAG-DDX10. Pour appuyer le choix de ce dernier, des expériences d'immunoprécipitation et d'immunofluorescence ont été réalisées et les résultats montrent que les protéines DDX10 et Che-1/AATF interagissent ensemble et qu'elles se co-localisent dans le nucléole. De plus, les deux formes mutées de DDX10 ne semblent pas avoir d'effet sur l'interaction de DDX10 avec Che-1 ainsi que sur leur co-localisation dans le nucléole. Nous avons aussi étudié la prolifération cellulaire à l'aide des expériences de FACS qui ont montrées que la majorité des cellules HeLa se trouvent en phases S et G2/M en présence des deux formes mutées de DDX10 comparé avec la forme sauvage. Par ailleurs, des expériences réalisées par quantification de la fluorescence en immunomicroscopie du marqueur de prolifération Ki-67 ont confirmé que les deux mutants de DDX10 stimulent la prolifération cellulaire. Finalement, nous avons réussi à exprimer la protéine recombinante GST-DDX10 in vitro dans les bactéries Rosetta, mais sans être capable de la purifier pour s'en servir pour des expériences de « GST-Pulldown ». ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Nucléole, biogenèse des ribosomes, cancer du sein, ARN hélicases, DDX10

Type:	Mémoire accepté
Informations complémentaires:	Le mémoire a été numérisé tel que transmis par l'auteur
Directeur de thèse:	Dragon, François
Mots-clés ou Sujets:	ARN hélicase, Cancer du sein, Mutation (Biologie), Nucléole, Prolifération cellulaire, Ribosome, DDX10, Che-1
Unité d'appartenance:	Faculté des sciences > Département des sciences biologiques
Déposé par:	Service des bibliothèques
Date de dépôt:	09 sept. 2014 14:53
Dernière modification:	01 nov. 2014 02:28
Adresse URL :	http://archipel.uqam.ca/id/eprint/6169

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