Effets de mutations létales dans la région C-terminale de la protéine Dbp4 chez la levure Saccharomyces cerevisiae

Hachana, Soumaya (2013). « Effets de mutations létales dans la région C-terminale de la protéine Dbp4 chez la levure Saccharomyces cerevisiae » Mémoire. Montréal (Québec, Canada), Université du Québec à Montréal, Maîtrise en biologie.

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Résumé

Chez la levure Saccharomyces cerevisiae, Dbp4 est une ARN hélicase putative qui fait partie de la famille « DEAD-box ». Cette enzyme nucléolaire est susceptible de jouer un rôle capital dans le processus de biogenèse des ribosomes puisqu'elle participe à la maturation de l'ARNr 18S, qui est requis pour la formation de la petite sous-unité 40S. Les protéines « DEAD-box » sont caractérisées par neuf motifs conservés formant le cœur catalytique de l'enzyme. Cette région est flanquée par des régions amino- et carboxy (C)-terminales. Le but de mon projet de recherche était d'identifier et caractériser des mutations au niveau de la région C-terminale de Dbp4 causant une létalité chez la levure. Pour ce faire, une technique de mutagenèse par "error-prone PCR" a été utilisée pour créer des mutations aléatoires dans cette région de Dbp4. Une banque de 60 000 clones a ainsi été générée dans notre laboratoire, que j'ai testée à l'aide d'un système génétique qui a permis d'identifier les mutants non fonctionnels. À ce jour, nous avons analysé près de 10000 clones. Nos résultats indiquent que 2% des clones contiennent des mutations létales. De ce nombre, 94 clones produisent une Dbp4 mutante de pleine longueur. Le séquençage des mutants de Dbp4 a dévoilé que les mutations sont réparties tout au long de la région C-terminale. Étant donné que les ARN hélicases jouent des rôles importants dans les processus nécessitant de gros complexes ARN-protéines, il est possible que Dbp4 agisse en association avec d'autres protéines. Comme la protéine nucléolaire Bfr2 présente une forte affinité pour Dbp4, nous avons vérifié par la technique de co-immunoprécipitation les interactions entre les mutants sélectionnés et Bfr2. Nos résultats confirment l'affinité entre Dbp4 et son partenaire protéique même en présence de mutations. Nous avons également montré par immunofluorescence qu'une mutation non fonctionnelle empêche la localisation nucléolaire de Dbp4. Il sera intéressant aussi d'examiner l'effet des mutations sur l'activité de Dbp4 dans la maturation de l'ARNr 18S par buvardage de type northern, ce qui nous aidera à mieux comprendre le rôle et la fonction de la protéine nucléolaire Dbp4 dans le processus à la fois captivant et sophistiqué de la biogenèse des ribosomes. Mon travail de recherche a été réalisé dans le but d'affiner notre compréhension des mécanismes d'assemblage des ARNr dans le processus de la biogenèse des ribosomes. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Dbp4, ARN hélicase, « coiled-coil », biogenèse des ribosomes.

Type:	Mémoire accepté
Informations complémentaires:	Le mémoire a été numérisé tel que transmis par l'auteur
Directeur de thèse:	Ouellet, François
Mots-clés ou Sujets:	ARN hélicase, ARN ribosomique, Mutagénèse, Ribosome, Saccharomyce cerevisiae, Protéine Dbp4
Unité d'appartenance:	Faculté des sciences > Département des sciences biologiques
Déposé par:	Service des bibliothèques
Date de dépôt:	09 sept. 2014 19:06
Dernière modification:	01 nov. 2014 02:28
Adresse URL :	http://archipel.uqam.ca/id/eprint/6111

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