Étude de la variante protéique P312R de la sous-unité PSMC5 du protéasome

Comeau, Ève (2025). « Étude de la variante protéique P312R de la sous-unité PSMC5 du protéasome » Mémoire. Montréal (Québec, Canada), Université du Québec à Montréal, Maîtrise en biochimie.

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Résumé

Le protéasome assure un rôle essentiel dans le maintien de l’homéostasie cellulaire en exécutant la dégradation protéolytique. La maladie PSMC5, affectant une vingtaine d'individus mondialement, résulte d’une mutation génétique de la sous-unité PSMC5 du protéasome. Malgré la présence de retards neurodéveloppementaux chez les enfants atteints, les implications sur la santé demeurent inconnues. Puisque l’ATPase PSMC5 médie l’entrée des protéines dans la chambre protéolytique suite à leur déubiquitination, l’hypothèse est que la mutation P312R (c.935C>G, p.Pro312Arg) altère l’activité ATPase, réduisant donc l’entrée des protéines dans la chambre catalytique. Une prédiction bio-informatique par AlphaFold a démontré l’obstruction du site de liaison à l’ATP de la sous-unité PSMC5 lorsque la proline 312 est remplacée par une arginine. Par ailleurs, des résultats provenant de la transfection transitoire de PSMC5 chez des cellules HeLa ont indiqué une réduction fonctionnelle du protéasome due à la mutation P312R. Précisément, une augmentation de la colocalisation de HA-PSMC5 P312R avec le signal immunofluorescent de l’ubiquitine était observée. Parallèlement, des lignées cellulaires SH-SY5Y clonales WT et P312R ont été générées et sélectionnées selon une abondance élevée ou faible de HA-PSMC5. La caractérisation détaillée des clones par immunobuvardage révèle des niveaux similaires de l’ubiquitine, de la chaîne de polyubiquitine liée à la lysine 48 (K48), ainsi que de plusieurs sous-unités du protéasome entre les conditions WT et P312R. Par ailleurs, un dosage du phosphate au vert de malachite couplé à un ELISA en sandwich a révélé que l’hydrolyse de l’ATP du protéasome n’est pas significativement affectée par la mutation P312R. Cette observation suggère la présence d’un mécanisme compensatoire impliquant les six sous-unités ATPases. Cette recherche permettra de comprendre les mécanismes cellulaires affectés par la variante P312R de la sous-unité PSMC5 du protéasome. Ceux-ci élucidés, il sera possible d’évaluer la capacité de certaines molécules à augmenter l’activité catalytique du protéasome, ouvrant donc la voie au développement de traitements potentiels. _____________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Protéasome, Mutation P312R, PSMC5, Ubiquitine

Type:	Mémoire accepté
Informations complémentaires:	Fichier numérique reçu et enrichi en format PDF/A.
Directeur de thèse:	Lussier, Marc
Mots-clés ou Sujets:	Protéasome / Mutation / P312R / PSMC5 / Ubiquitine
Unité d'appartenance:	Faculté des sciences > Département de chimie Faculté des sciences > Département des sciences biologiques
Déposé par:	Service des bibliothèques
Date de dépôt:	28 mai 2025 08:02
Dernière modification:	28 mai 2025 08:02
Adresse URL :	http://archipel.uqam.ca/id/eprint/18809

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