Étude de la stabilité de la diamine oxydase végétale en présence de cryoprotecteurs

Megoura, Meriem (2023). « Étude de la stabilité de la diamine oxydase végétale en présence de cryoprotecteurs » Mémoire. Montréal (Québec, Canada), Université du Québec à Montréal, Maîtrise en biochimie.

Fichier(s) associé(s) à ce document :

Prévisualisation	PDF Télécharger (3MB)

Résumé

La Diamine oxydase végétale (vDAO) a été proposée comme agent thérapeutique pour le traitement des dysfonctions liées à l’histamine. L’une des principales limites à l’utilisation des protéines dans le domaine pharmaceutique est leur instabilité en milieu liquide. La lyophilisation est l’une des méthodes les plus fiables pour l’obtention de protéine en poudre. Le cycle de lyophilisation génère différents types de stress, tels que la variation du pH, l’agrégation des protéines, la cristallisation. C’est pourquoi l’ajout des cryoprotecteurs comme les disaccharides (sucrose et tréhalose) dans la formulation vont générer des liaisons hydrogène avec l’enzyme (en remplaçant celles établies avec l’eau) permettant de stabiliser sa conformation et ainsi préserver son activité durant le séchage et le stockage à long terme. L’objectif principal était d’investiguer l’effet des disaccharides sur la stabilité de la vDAO de Pisum sativum durant le séchage et l’entreposage. L'effet des cryoprotecteurs sur l'activité enzymatique a été principalement investigué par la méthode spectrophotométrique DCHBS-AAP-HRP pour le dosage du peroxyde d'hydrogène comme produit de réaction. Les propriétés thermiques des poudres, notamment la température de transition vitreuse et le contenu en humidité ont été évalués par calorimétrie à balayage différentiel (DSC) et par analyse thermogravimétrique (TGA), respectivement. Par la suite, les poudres issues de la stabilité ont été formulées en comprimés monolithiques, suivi par la caractérisation de l’activité de l’enzyme en phase sèche et en milieux gastro-intestinaux. La présente étude a révélé le potentiel des disaccharides saccharose et tréhalose pour protéger la vDAO du stress de lyophilisation, du stockage à long terme et des fluides gastro-intestinaux simulés. Sous forme de poudre, le saccharose et le tréhalose ont un effet similaire sur la vDAO, et ont permis de maintenir une teneur minimale en humidité de 4% avec une activité enzymatique atteignant 60% après 18 mois de stockage à 4 °C. Le stockage à -20 °C affecte considérablement l'activité de la vDAO, avec ou sans additif, atteignant 40%. Dans les fluides gastro-intestinaux simulés, le saccharose a montré une meilleure protection de l'activité enzymatique et la libération a atteint 80% de l'activité totale, 70% pour le tréhalose et 20% dans le témoin. Privilégier un stockage à température ambiante pourrait être une excellente alternative pour conserver une meilleure activité enzymatique, et aussi réduire les couts de stockage et transport. _____________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Diamine oxydase, Cryoprotecteurs, Lyophilisation, Sucrose, Tréhalose.

Type:	Mémoire accepté
Informations complémentaires:	Fichier numérique reçu et enrichi en format PDF/A.
Directeur de thèse:	Mateescu, Mircea A.
Mots-clés ou Sujets:	Diamine oxydase / Stabilité / Lyophilisation / Cryoprotecteurs / Saccharose / Tréhalose / Pisum sativum
Unité d'appartenance:	Faculté des sciences > Département de chimie Faculté des sciences > Département des sciences biologiques
Déposé par:	Service des bibliothèques
Date de dépôt:	19 avr. 2023 10:51
Dernière modification:	19 avr. 2023 10:51
Adresse URL :	http://archipel.uqam.ca/id/eprint/16490

Modifier les métadonnées (propriétaire du document)

Statistiques